Prueba esto:
RewriteRule ^medellin/(?!negocio)(.*)$ /medellin/negocio.php?titulo=$1 [L]
Cuando se ingrese medellin/
algodistintodenegocio ejecutara el archivo /medellin/negocio.php?titulo=
algodistintodenegocio
Prueba haciendo una redireccion 301 a google por si no te funciona y vas probando.
RewriteRule ^medellin/(?!negocio)(.*)$ http://www.google.com [R=301,L]